安化黑茶是采用湖南雪峰山脈茶區(qū)大中葉群體品種的鮮葉，經(jīng)過殺青、揉捻、渥堆、松柴明火干燥等四大工藝加工而成，具有色澤黑褐油潤，滋味醇和或微澀，湯色紅明艷亮，略帶獨特松煙香品質(zhì)特征的毛茶及以其為原料蒸壓成形的緊壓茶總稱。
安化黑茶具有多種對人體有益的保健功能，而這些生理保健功效主要是由茶多酚、茶多糖及茶色素等起著主要作用。安化黑茶的生理保健功能被人們所熟知，例如抗氧化、清除氧自由基、降脂、調(diào)節(jié)脂代謝、降糖、調(diào)節(jié)糖代謝、保護心血管、抗腫瘤作用、抗菌抑菌作用等生理活性功能。
最新研究報道，安化黑茶提取物有可能還具有生理抗炎的作用，但是具體作用機理機制暫時處于初級研究階段。炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases，IBD)，廣義的解釋包括各種的腸道炎性疾病，一般來說是累及回腸、直腸、結腸這些的都可以稱作炎癥性腸病，它的表現(xiàn)一般都是腹瀉、腹痛，甚至有些人可以出現(xiàn)血便的癥狀。炎癥性腸病主要包括,潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩病。潰瘍性結腸炎(UC)是一種能夠致使直腸和/或結腸發(fā)炎并可以伴隨潰瘍的疾病，具體發(fā)病原因還不明確，但已有研究證實促炎和抗炎細胞因子的分泌失衡，在UC發(fā)病及病情發(fā)展中產(chǎn)生著重要的作用。
通過建立葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium,DSS)誘導的ICR小鼠結腸炎模型，探討安化黑茶對腸炎的潛在保護作用及分子機理研究，為功能性食品的開發(fā)提供科學的理論基礎。安化黑茶對DSS誘導ICR小鼠結腸炎的抑制作用ICR小鼠連續(xù)飲用3%DSS 7 d誘導潰瘍性結腸炎，用安化黑茶提取物灌胃，評估安化黑茶的抗炎作用。實驗中可以觀察到DSS組小鼠體重減輕明顯，毛色暗淡，精神萎靡，其排泄物肉眼可見血性粘液，腹瀉癥狀嚴重，與空白組小鼠DAI評分相比，DSS組小鼠DAI評分明顯提高(p<0.01)。實驗小鼠灌胃安化黑茶提取物后，可以觀察到上述病癥得到明顯的緩解。與DSS損傷組相比，高劑量安化黑茶提取物和低劑量安化黑茶提取物組的小鼠均能緩解ICR小鼠體重的下降，降低糞便隱血發(fā)生率，減少腹瀉次數(shù)，且高劑量濃度安化黑茶提取物組作用效果更加明顯。DSS組小鼠結腸腸壁明顯增厚,腸粘膜出現(xiàn)嚴重的充血、水腫；相對于對照組，小鼠結腸長度明顯縮短(P<0.01)；相對于對照組，髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)和丙二醛(malonaldehyde，MDA)活性明顯增高，而安化黑茶提取物灌胃的兩個濃度組小鼠MPO和丙二醛濃度明顯下調(diào)(p<0.01)；同時，安化黑茶提取物灌胃小鼠結腸壁未有明確增厚和結腸黏膜充血癥狀得到有效的改善。
安化黑茶可以改善潰瘍性結腸炎小鼠免疫系統(tǒng)紊亂，降低結腸組織中MPO和MPO的含量，減少小鼠結腸炎癥組織的損傷。相對于對照組小鼠，DSS組小鼠結腸組織炎癥因子TNF-α、IL-lβ和IFN-y mRNA的相對表達水平明升上升，而補充安化黑茶提取組小鼠結腸這些炎癥因子則受到明顯抑制；采Western blot技術分析小鼠結腸炎癥因子蛋白表達水平，其結果與RT-qPCR技術分析結果基本一致;進一步采用免疫組化技術，確定補充安化黑茶提取組小鼠結腸組織炎癥因子表達下降，提示安化黑茶能抑制DSS誘導的小鼠結腸炎癥組織炎癥因子的表達。安化黑茶抑制LPS誘導巨噬細胞的炎癥及炎癥因子表達巨噬細胞RAW264.7在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激的炎癥體外模型,采用安化黑茶提取物處理，在細胞水平確定其是否具有抗炎作用及可能的分子機理。安化黑茶對LPS誘導RAW264.7細胞毒性影響。不同濃度的安化黑茶提取物處理RAW264.7細胞24 h后，發(fā)現(xiàn)各組細胞數(shù)量排列密集，形狀呈梭狀，生長狀態(tài)良好，細胞狀態(tài)無明顯差異。采用MTS法檢測對照組，安化黑茶組OD值之間無顯著差異(p>0.05)。說明0～100μg/mL范圍內(nèi)，安化黑茶提取物對RAW264.7細胞無明顯的細胞毒性，對其生長、狀態(tài)及活性無影響，可用于后續(xù)實驗研究。安化黑茶對LPS誘導RAW264.7細胞炎癥因子表達的影響。分別采用RT-qPCR和Western blot比較各組細胞炎癥基因表達差異。相對于對照組，LPS組細胞促炎因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的mRNA表達量和蛋白表達明顯上升；相對于LPS組，安化黑茶提取物能夠明顯降低炎癥因子的表達，且呈明顯的量效關系。安化黑茶對LPS誘導RAW264.7細胞中轉(zhuǎn)錄活性的影響。核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear transcription factor-KB，NF-κB/p65)是調(diào)控炎癥因子表達的重要轉(zhuǎn)錄因子，TNF-α、IL-1β和IFN-γ基因啟動子區(qū)域均存在一個或多個NF-κB的結合位點。分別利用熒光素酶報告基因技術，研究安化黑茶對NF-κB活性的影響。
? ? 結果發(fā)現(xiàn)：與對照組相比，LPS誘導組細胞NF-κB相對熒光素酶活性(relative fluorescence intensity，RLU)顯著升高；而安化黑茶提取物組細胞中RLU值顯著減少，呈劑量依賴性，提示安化黑茶提取物可能通過抑制NF-κB的活性，從而抑制炎癥因子表達。
安化黑茶提取物對DSS誘導的小鼠結腸炎癥具有抑制作用，它能明顯改善小鼠的炎癥癥狀；安化黑茶提取物能下調(diào)關鍵炎癥因子TNF-α、IL-lβ和IFN-γ的表達，其作用的分子機理可能與安化黑茶提取物抑制NF-κB的活性相關。
資料來源：中南林業(yè)科技大學碩士學位論文
